(Akış sitometrisi, FCM), boyanmış hücre belirteçlerinin floresan yoğunluğunu ölçen bir hücre analizörüdür. Tek hücrelerin analizi ve sınıflandırılmasına dayalı olarak geliştirilen yüksek teknolojili bir teknolojidir. Hücrelerin boyutunu, iç yapısını, DNA'sını, RNA'sını, proteinlerini, antijenlerini ve diğer fiziksel veya kimyasal özelliklerini hızlı bir şekilde ölçebilir ve sınıflandırabilir ve bu sınıflandırmaların toplanmasına dayanabilir.
Akış sitometresi temel olarak aşağıdaki beş parçadan oluşur:
1 Akış odası ve akışkan sistemi
2 Lazer ışık kaynağı ve ışın şekillendirme sistemi
3 Optik sistem
4 Elektronik, depolama, görüntüleme ve analiz sistemi
5 Hücre sıralama sistemi
Bunlar arasında, lazer ışık kaynağı ve ışın oluşturma sistemindeki lazer uyarımı, akış sitometrisinde floresan sinyallerinin ana ölçümüdür. Uyarım ışığının yoğunluğu ve pozlama süresi, floresan sinyalinin yoğunluğuyla ilişkilidir. Lazer, tek dalga boylu, yüksek yoğunluklu ve yüksek kararlılıkta aydınlatma sağlayabilen tutarlı bir ışık kaynağıdır. Bu gereksinimleri karşılamak için ideal uyarım ışık kaynağıdır.
Lazer kaynağı ile akış odası arasında iki silindirik mercek bulunur. Bu mercekler, lazer kaynağından yayılan dairesel kesitli bir lazer ışınını daha küçük kesitli (22 μm × 66 μm) eliptik bir ışına odaklar. Bu eliptik ışın içindeki lazer enerjisi, normal dağılıma göre dağıtılır ve lazer algılama alanından geçen hücreler için tutarlı aydınlatma yoğunluğu sağlar. Öte yandan, optik sistem, akış odasının yukarı ve aşağı akışı olmak üzere kabaca iki gruba ayrılabilen birden fazla mercek, iğne deliği ve filtre setinden oluşur.
Akış odasının önündeki optik sistem bir mercek ve iğne deliğinden oluşur. Mercek ve iğne deliğinin (genellikle iki mercek ve bir iğne deliği) temel işlevi, lazer kaynağı tarafından yayılan dairesel kesitli lazer ışınını daha küçük kesitli eliptik bir ışına odaklamaktır. Bu, lazer enerjisini normal dağılıma göre dağıtır, lazer algılama alanındaki hücreler için tutarlı aydınlatma yoğunluğu sağlar ve dağınık ışıktan kaynaklanan girişimi en aza indirir.
Üç ana filtre türü vardır:
1: Uzun geçiş filtresi (LPF) - yalnızca belirli bir değerden daha yüksek dalga boyuna sahip ışığın geçmesine izin verir.
2: Kısa geçiş filtresi (SPF) - yalnızca belirli bir değerin altındaki dalga boyuna sahip ışığın geçmesine izin verir.
3: Bant geçiren filtre (BPF) - yalnızca belirli bir dalga boyu aralığındaki ışığın geçmesine izin verir.
Farklı filtre kombinasyonları, farklı dalga boylarındaki floresan sinyallerini ayrı fotomultiplier tüplere (PMT'ler) yönlendirebilir. Örneğin, PMT'nin önünde yeşil floresansı (FITC) tespit etmek için kullanılan filtreler LPF550 ve BPF525'tir. PMT'nin önünde turuncu-kırmızı floresansı (PE) tespit etmek için kullanılan filtreler LPF600 ve BPF575'tir. PMT'nin önünde kırmızı floresansı (CY5) tespit etmek için kullanılan filtreler LPF650 ve BPF675'tir.
Akış sitometrisi esas olarak hücre ayırma için kullanılır. Bilgisayar teknolojisinin ilerlemesi, immünolojinin gelişmesi ve monoklonal antikor teknolojisinin icadıyla biyoloji, tıp, eczacılık ve diğer alanlardaki uygulamaları giderek yaygınlaşmaktadır. Bu uygulamalar arasında hücre dinamikleri analizi, hücre apoptozu, hücre tiplemesi, tümör teşhisi, ilaç etkinliği analizi vb. yer almaktadır.
Gönderi zamanı: 21-Eyl-2023
