(Akış sitometrisi, FCM) boyalı hücre belirteçlerinin floresans yoğunluğunu ölçen bir hücre analizörüdür. Tek hücrelerin analizi ve sınıflandırılmasına dayalı olarak geliştirilmiş yüksek teknolojili bir teknolojidir. Hücrelerin boyutunu, iç yapısını, DNA'sını, RNA'sını, proteinlerini, antijenlerini ve diğer fiziksel veya kimyasal özelliklerini hızlı bir şekilde ölçebilir, sınıflandırabilir ve bu sınıflandırmaların toplanmasına dayanabilir.
Akış sitometresi temel olarak aşağıdaki beş bölümden oluşur:
1 Akış odası ve akışkan sistemi
2 Lazer ışık kaynağı ve ışın şekillendirme sistemi
3 Optik sistem
4 Elektronik, depolama, görüntüleme ve analiz sistemi
5 Hücre sıralama sistemi
Bunlar arasında, lazer ışık kaynağındaki lazer uyarımı ve ışın oluşturma sistemi, akış sitometrisinde floresans sinyallerinin ana ölçümüdür. Uyarma ışığının yoğunluğu ve maruz kalma süresi, floresans sinyalinin yoğunluğuyla ilişkilidir. Lazer, tek dalga boyunda, yüksek yoğunluklu ve yüksek stabilitede aydınlatma sağlayabilen tutarlı bir ışık kaynağıdır. Bu gereksinimleri karşılamak için ideal uyarma ışık kaynağıdır.
Lazer kaynağı ile akış odası arasında iki silindirik mercek bulunmaktadır. Bu lensler, lazer kaynağından yayılan dairesel kesitli bir lazer ışınını, daha küçük kesitli (22 μm × 66 μm) eliptik bir ışına odaklar. Bu eliptik ışın içindeki lazer enerjisi normal bir dağılıma göre dağıtılır ve lazer algılama alanından geçen hücreler için tutarlı aydınlatma yoğunluğu sağlanır. Öte yandan, optik sistem birden fazla mercek, iğne deliği ve filtre setinden oluşur ve bunlar kabaca iki gruba ayrılabilir: akış odasının yukarı akışı ve aşağı akışı.
Akış odasının önündeki optik sistem bir mercek ve iğne deliğinden oluşur. Mercek ve iğne deliğinin (genellikle iki mercek ve bir iğne deliği) ana işlevi, lazer kaynağı tarafından yayılan dairesel kesitli lazer ışınını, daha küçük kesitli eliptik bir ışına odaklamaktır. Bu, lazer enerjisini normal bir dağılıma göre dağıtarak, lazer algılama alanı boyunca hücreler için tutarlı aydınlatma yoğunluğu sağlar ve başıboş ışıktan kaynaklanan paraziti en aza indirir.
Üç ana filtre türü vardır:
1: Uzun geçiş filtresi (LPF) - yalnızca belirli bir değerden daha yüksek dalga boylarına sahip ışığın geçmesine izin verir.
2: Kısa geçiş filtresi (SPF) - yalnızca belirli bir değerin altındaki dalga boylarına sahip ışığın geçmesine izin verir.
3: Bant geçiş filtresi (BPF) - yalnızca belirli bir dalga boyu aralığındaki ışığın geçmesine izin verir.
Farklı filtre kombinasyonları, farklı dalga boylarındaki floresan sinyallerini ayrı fotomultiplier tüplere (PMT'ler) yönlendirebilir. Örneğin, PMT'nin önündeki yeşil floresanyı (FITC) tespit etmeye yönelik filtreler LPF550 ve BPF525'tir. PMT'nin önündeki turuncu-kırmızı floresanı (PE) tespit etmek için kullanılan filtreler LPF600 ve BPF575'tir. PMT'nin önündeki kırmızı floresanı (CY5) tespit etmeye yönelik filtreler LPF650 ve BPF675'tir.
Akış sitometrisi esas olarak hücre sınıflandırması için kullanılır. Bilgisayar teknolojisinin ilerlemesi, immünolojinin gelişmesi ve monoklonal antikor teknolojisinin bulunmasıyla birlikte biyoloji, tıp, eczacılık ve diğer alanlardaki uygulamaları giderek yaygınlaşmaktadır. Bu uygulamalar arasında hücre dinamiği analizi, hücre apoptozu, hücre tiplemesi, tümör tanısı, ilaç etkinlik analizi vb. yer alır.
Gönderim zamanı: Eylül-21-2023
