(Akış sitometrisi, FCM), lekeli hücre belirteçlerinin floresan yoğunluğunu ölçen bir hücre analizörüdür. Tek hücrelerin analizine ve sıralanmasına dayanarak geliştirilen yüksek teknoloji teknolojisidir. Boyutu, iç yapıyı, DNA'yı, RNA'yı, proteinleri, antijenleri ve hücrelerin diğer fiziksel veya kimyasal özelliklerini hızlı bir şekilde ölçebilir ve sınıflandırabilir ve bu sınıflandırmaların toplanmasına dayanabilir.
Akış sitometresi esas olarak aşağıdaki beş bölümden oluşur:
1 Akış Odası ve Akışkanlar Sistemi
2 Lazer Işık Kaynağı ve Işın Şekillendirme Sistemi
3 Optik Sistem
4 Elektronik, Depolama, Ekran ve Analiz Sistemi
5 Hücre Sıralama Sistemi
Bunlar arasında, lazer ışık kaynağı ve ışın oluşturma sistemindeki lazer uyarımı, akış sitometrisindeki floresan sinyallerinin ana ölçümüdür. Uyarma ışığının yoğunluğu ve maruz kalma süresi floresan sinyalinin yoğunluğu ile ilgilidir. Lazer, tek dalga boyu, yüksek yoğunluklu ve yüksek istikrarlı aydınlatma sağlayabilen tutarlı bir ışık kaynağıdır. Bu gereksinimleri karşılamak için ideal uyarma ışık kaynağıdır.
Lazer kaynağı ile akış odası arasında iki silindirik lens vardır. Bu lensler, lazer kaynağından yayılan dairesel bir kesitli bir lazer ışını daha küçük bir kesit (22 μm x 66 μm) ile eliptik bir ışına odaklar. Bu eliptik ışın içindeki lazer enerjisi, normal dağılıma göre dağıtılır ve lazer algılama alanından geçen hücreler için tutarlı aydınlatma yoğunluğu sağlar. Öte yandan, optik sistem kabaca iki gruba ayrılabilen çoklu lens, pin delikleri ve filtrelerden oluşur: akış odasının yukarı akış ve akış aşağı.
Akış odasının önündeki optik sistem bir lens ve iğne deliğinden oluşur. Lens ve iğne deliğinin ana fonksiyonu (genellikle iki lens ve bir iğne deliği) lazer ışını, lazer kaynağı tarafından yayılan dairesel bir kesitle daha küçük bir kesitli eliptik bir ışına odaklamaktır. Bu, lazer enerjisini normal bir dağılıma göre dağıtır, lazer algılama alanı boyunca hücreler için tutarlı aydınlatma yoğunluğu sağlar ve başıboş ışıktan etkileşimi en aza indirir.
Üç ana filtre türü vardır:
1: Uzun Geçiş Filtresi (LPF) - Yalnızca belirli bir değerden daha yüksek dalga boylarına sahip ışığın geçmesi için izin verir.
2: Kısa geçiş filtresi (SPF) - yalnızca belirli bir değerin altındaki dalga boylarına sahip ışığın geçmesi için izin verir.
3: Bant Geçidi Filtresi (BPF) - Yalnızca belirli bir dalga boyu aralığındaki ışığın geçmesine izin verir.
Farklı filtre kombinasyonları, farklı dalga boylarındaki floresan sinyallerini ayrı ayrı fotomultiplier tüplere (PMT'ler) yönlendirebilir. Örneğin, PMT'nin önünde yeşil floresan (FITC) tespit etmek için filtreler LPF550 ve BPF525'tir. PMT'nin önünde turuncu-kırmızı floresan (PE) tespit etmek için kullanılan filtreler LPF600 ve BPF575'tir. PMT'nin önündeki kırmızı floresan (CY5) tespit etmek için filtreler LPF650 ve BPF675'tir.
Akış sitometrisi esas olarak hücre sıralaması için kullanılır. Bilgisayar teknolojisinin ilerlemesi, immünolojinin gelişimi ve monoklonal antikor teknolojisinin icadı ile biyoloji, tıp, eczane ve diğer alanlardaki uygulamaları giderek yaygınlaşıyor. Bu uygulamalar arasında hücre dinamiği analizi, hücre apoptozu, hücre tipleme, tümör tanısı, ilaç etkinliği analizi vb.
Gönderme Zamanı: Eylül-21-2023
